細(xì)胞核提取試劑盒 貨號(hào):SP35100
中文名: 細(xì)胞核提取試劑盒 貨號(hào):SP35100
英文名: Nuclear Extraction Kit
儲(chǔ)存條件: 見(jiàn)詳情
相關(guān)類別:
貨號(hào): SP35100
品牌:
發(fā)布時(shí)間: 2024-12-22 01:45:11
相關(guān)信息
英文名稱 | Nuclear Extraction Kit |
---|---|
儲(chǔ)存條件 | 短期使用可4℃儲(chǔ)存,長(zhǎng)期保存請(qǐng)置于-20℃或-70℃ |
單位 | 盒 |
規(guī)格 | 50T 100T |
規(guī)格:50T/100T
保存:短期使用可4℃儲(chǔ)存,長(zhǎng)期保存請(qǐng)置于-20℃或-70℃。
產(chǎn)品內(nèi)容:
組份 | ||
Lysis Buffer | 100 mL | 200 mL |
Reagent A | 2.5mL | 5mL |
Medium Buffer | 25 mL | 50 mL |
Store Buffer | 5 mL | 10 mL |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
細(xì)胞核提取試劑盒用于從動(dòng)物細(xì)胞或組織中分離出完整而純化的細(xì)胞核。適合于動(dòng)物軟組織(肝或腦組織)和硬組織(肌肉)以及培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞核的制備。其制備物產(chǎn)量高,可以被用于細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶和核酶,性能穩(wěn)定。
操作步驟:1. 樣本處理
a. 組織勻漿:稱取100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等,PBS或生理鹽水沖洗,洗凈血水,濾紙吸干,用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內(nèi)。加入1.0 mL預(yù)冷的Lysis Buffer,再加入50μL Reagent A,0℃冰浴中上下研磨組織20次;有未研磨開(kāi)的組織,可用雙層紗布過(guò)濾。
b. 培養(yǎng)細(xì)胞勻漿:消化細(xì)胞,PBS洗滌,800 g 離心5~10 min收集細(xì)胞,計(jì)數(shù)。每次提取需要5 ×107個(gè)細(xì)胞,加入1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸細(xì)胞,再加入50μL Reagent A,將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi),0℃冰浴研磨細(xì)胞20~30次。
2. 將組織或細(xì)胞勻漿物轉(zhuǎn)移到1.5mL離心管中,4℃,700g 離心5 min。細(xì)胞核沉淀在收集管底部,棄上清。加入0.5 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸沉淀。
3. 取另一新離心管內(nèi)加入0.5 mL Medium Buffer,吸取上一步的重懸液,沿管壁小心地加入到此離心管中,置于Medium Buffer之上,4℃,700 g 離心5min。細(xì)胞核沉淀在管底。
4. 棄上清,在細(xì)胞核沉淀中加入0.5 mL Lysis Buffer重懸細(xì)胞核沉淀,1000g 離心10min ,棄上清,得到較純的細(xì)胞核沉淀。
5. 用50-100μL Store Buffer 或合適的反應(yīng)緩沖液重懸細(xì)胞核沉淀,立即使用或-70℃保存。
注意事項(xiàng):
1. 為保證獲得完整的細(xì)胞核,務(wù)必做到:第一,全程低溫操作;第二,快速;第三,在不破壞亞細(xì)胞器的情況下破碎細(xì)胞,這是制備細(xì)胞核的最關(guān)鍵環(huán)節(jié)。與組織塊相比,培養(yǎng)細(xì)胞特別是貼壁培養(yǎng)細(xì)胞在用玻璃勻漿器勻漿時(shí)較難破壁,因而要選用小容量玻璃勻漿器、間隙嚴(yán)密的研杵上下研磨培養(yǎng)細(xì)胞。
2. 以離心力g計(jì)算正確的離心速度,不同的離心機(jī)可據(jù)此精確計(jì)算離心速度。
3. 進(jìn)行Western Blot和2D-膠電泳,可直接加入上樣緩沖液裂解細(xì)胞核。轉(zhuǎn)速與離心力換算: G=1.11×(10-5)×R×[rpm]2 G為離心力,一般以g(重力加速度)的倍數(shù)來(lái)表示; [rpm]2即:轉(zhuǎn)速的平方; R為半徑,單位為厘米。
注意:
1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請(qǐng)勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請(qǐng)勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和口罩操作。
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規(guī)格說(shuō)明
對(duì)于重量小于數(shù)百毫克的小包裝產(chǎn)品,正確的分裝方法是將樣品溶于一定體積的溶劑或緩沖液中后,再進(jìn)行分裝。對(duì)于用戶用稱量方法分裝后發(fā)現(xiàn)量缺少的投訴,本公司恕不受理。
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